2026年，中国科学技术大学等团队在EMBO Molecular Medicine上发表了一项题为Broadly neutralizing nanobodies target a defined structural pivot site on the RSV fusion protein的RSV纳米抗体研究。
研究从骆驼免疫库中筛选出两个纳米抗体1G9和1D8，冷冻电镜结构揭示其靶向F蛋白抗原位点IV中的"结构枢轴"，同时结合构象稳定区与亚稳态HRB起始段，从而锁定Pre?F构象、阻止膜融合。体外，二者对RSV A2、B（包括尼塞维单抗逃逸株）及Long株的IC50低至0.41?nM；小鼠模型中，Fc融合的1G9在预防（2?mg/kg）和治疗（8?mg/kg）方案下均显著降低病毒载量，且效果优于尼塞维单抗。该研究为RSV提供了兼具预防与治疗潜力的新型候选药物。
AntibodySystem产品引用
本研究在表位竞争实验中使用了AntibodySystem的多种RSV F蛋白构象特异性抗体：
RVV02818-Anti-HRSV F Protein Antibody (131-2A)（位点I）、
RVV02814-Anti-HRSV-A F/Fusion glycoprotein F0 Antibody (MPE8)（位点II/III/IV/V）、
RVV02816-Anti-HRSV-A F/Fusion glycoprotein F0 Antibody (101F)（位点IV）、
DVV02813-Research Grade Anti-RSV F/Fusion glycoprotein F0 (hRSV90)（位点O/II/V）、
DVV02802-Research Grade Nirsevimab（位点?）。
上述抗体帮助明确了1G9/1D8靶向抗原位点IV且与101F竞争的关键信息。
RSV是婴幼儿和老年人急性下呼吸道感染的首要病因，全球5岁以下儿童每年超3300万感染、逾10万死亡。目前仅有两款预防性抗体药物：帕利珠单抗（需每月注射，仅限高危婴儿）和尼塞维单抗（单剂预防，但对已感染无效，且已出现逃逸突变）。
纳米抗体虽具有尺寸小、稳定性高、易工程化等优势，但此前候选分子（如ALX?0171）因半衰期短或中和谱窄未能临床转化。临床上亟需既能广谱中和RSV A/B亚型、又能治疗已感染的新型抗体。
团队用两种Pre?F蛋白（DS?Cav1和DS2）免疫骆驼，构建了库容3.7×10?的噬菌体展示文库。两轮淘选后阳性克隆率>95%。通过高通量中和筛选及产量评估，最终选定1G9和1D8。二者均可与hIgG1 Fc融合表达。
从噬菌体展示文库中分离并鉴定抗RSV F蛋白的纳米抗体
ELISA显示，1G9?Fc对DS?Cav1和DS2的EC??分别为0.245?nM和0.200?nM，1D8?Fc为0.213?nM和0.139?nM，二者均不结合Post?F，特异性识别RSV F蛋白。免疫荧光证实其能识别细胞膜上天然构象的F蛋白。
候选纳米抗体与不同构象F蛋白的结合特性
在微量中和试验中，1G9?Fc对RSV A2、RSV B（CH93(18)-18）和RSV Long株的IC50分别为0.47?nM、0.56?nM和2.05?nM；1D8?Fc为0.66?nM、0.41?nM和3.00?nM。
纳米抗体1G9与1D8对不同亚型RSV的中和及融合抑制活性
相比帕利珠单抗，二者对RSV A2和B的中和能力强10倍以上。尤其值得注意的是，尼塞维单抗对本次使用的RSV B株完全无效，而1G9/1D8对该株保持强效中和，凸显了靶向更保守位点（位点IV）的临床价值。
在病毒吸附后的融合抑制实验中，1G9和1D8仍能有效阻断感染，表明其主要通过抑制膜融合（而非吸附）发挥作用。
竞争ELISA表明，1G9与1D8彼此竞争，且仅与位点IV抗体101F竞争，不与位点I、II、III、V、?的抗体竞争，提示二者靶向位点IV内的重叠表位。
1G9与1D8识别Pre-F上相似的表位
冷冻电镜解析了1G9?Pre?F（2.77??）和1D8?Pre?F（3.26??）复合物结构。二者均以1:1比例结合Pre?F三聚体的每个单体，埋藏表面积约800??2，共享20个界面残基。关键结构发现是：它们结合于F蛋白的"结构枢轴"区域，该区域由一个构象稳定的结构域（残基411?458）和一段亚稳态的β链（残基466?468，连接HRB螺旋）组成。将Pre?F与Post?F结构比对可以清晰看到，在构象转换过程中，HRB需解旋重排，而466?468正是这一过程的启动点。
冷冻电镜揭示1G9与1D8结合RSV A2 Pre-F蛋白结构枢轴位点
1G9和1D8通过形成致密氢键网络，同时锚定稳定区和亚稳态区（例如1G9的CDR与R429、K433、S443等稳定区残基形成氢键，同时又与K465、S466、Y468等亚稳态残基形成氢键）。这种"分子夹具"作用将亚稳态区锁死在刚性结构域上，从而物理上阻止HRB解旋，使F蛋白长期滞留于Pre?F构象，无法启动膜融合。这与仅结合稳定区的已知抗体（如RB1）形成鲜明对比。
分析NCBI数据库中5535条RSV A和4343条RSV B的F蛋白序列发现，1G9/1D8所结合的残基在A/B亚型中的保守率均超过99.95%。这解释了它们对多种RSV毒株的广谱中和能力，也预示着较低的耐药风险。
在Balb/c小鼠模型中评估了Fc融合纳米抗体的效果。预防方案显示，1G9?Fc和1D8?Fc均显著降低感染后第4天肺部及鼻甲中的病毒RNA和滴度，其中1G9?Fc在鼻甲中的病毒清除优于尼塞维单抗。
候选纳米抗体对小鼠RSV感染的预防与治疗效果
治疗方案中，1G9?Fc和1D8?Fc同样显著降低病毒载量，而尼塞维单抗在肺部未达到显著效果。组织病理学显示，纳米抗体处理组小鼠的支气管、肺泡结构保存良好，未见明显炎症损伤。
值得注意的是，治疗组体重未见显著改善，研究者指出这可能是该小鼠模型中体重对RSV感染不敏感所致，但病毒学终点明确证实了治疗效果。
本研究尚存局限，动物保护实验仅测试了RSV A2，未在体内验证对RSV B的效果；临床毒株覆盖有限；治疗组体重指标不敏感。未来方向包括引入Fc的YTE突变以延长半衰期，以及开发吸入式VHH?IgA融合蛋白用于局部治疗。
该研究首次报道了同时靶向RSV F蛋白位点IV中"稳定区+亚稳态枢轴"的纳米抗体，通过冷冻电镜揭示了独特的"分子夹具"中和机制。1G9和1D8在体外对包括尼塞维单抗逃逸株在内的多种RSV亚型均显示强效中和，并在小鼠模型中首次验证了纳米抗体的治疗效果（而非仅预防）。其表位在数千条临床序列中高度保守，预示着低耐药风险。1G9?Fc兼具预防和治疗潜力，且可进一步工程化为长效或吸入剂型，有望成为继帕利珠单抗和尼塞维单抗之后的新一代RSV抗体药物。
