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兔单克隆抗体在横纹肌溶解相关急性肾损伤中的潜在应用

发表时间:2023-10-10

肌红蛋白(Mb)是一种微小的单体蛋白,其重量仅为17.8kDa,主要在脊椎动物的心脏和骨骼肌中表达。它具有结合、储存和运输氧到线粒体的关键作用。之前的研究已经发现,在心肌中,每克组织湿重中的Mb含量大约为2.5mg,而在骨骼肌中这个数值约为4.0mg。

Mb由珠蛋白(α-珠蛋白链和β-珠蛋白链)和血红素基团共同组成,它通常存在于脊椎动物的横纹肌和心肌中。然而,如果大量的Mb出现在血液、尿液或肾脏等器官中,这将是非常危险的,因为它可能引发一种可能危及生命的综合征——横纹肌溶解症(RM)综合征。横纹肌溶解症(RM)是骨骼肌受损和细胞内分解产物(主要包括Mb)释放到血液循环中。 横纹肌溶解的诱因多种多样,包括挤压伤、创伤、某些感染、药物、酒精和毒素。在这些因素中,Mb起着关键的作用,是横纹肌溶解病理生理学的重要组成部分。Mb是骨骼肌的主要成分,但当它释放到血液中时,可能会引发急性肾损伤(AKI),这是严重横纹肌溶解的危险并发症。

目前的研究已经明确,Mb通过三种机制引起急性肾损伤(AKI):第一种机制是肾小管堵塞,这是由Mb的毒性所导致的;其次,氧化损伤是由Mb中的铁解离和自由基的释放引起的;最后一种机制是由于Mb引起的脂质过氧化。

在诊断和基础研究中,抗体发挥着重要的作用。对于心肌梗死或横纹肌溶解的检测,Mb的实验室检查是最为重要在的患一这项发生指标。在实验动物的基础研究中,RM-AKI或挤压综合征-AKI(CS-AKI)仍然是是肾损伤的关键生物标志物。

Mb的抗体检测取决于抗体的特异性和亲和力,单克隆抗体正是针对具有高纯度和强特异性优势的特定表位进行研发的。它已被广泛应用于各种生物医学科学领域,并促进了许多学科的发展。特别是重组兔单克隆抗体,它具有诸多优势,包括更好的特异性和灵敏度、高批次间一致性和可重复性、无动物源性制剂、长期供应安全,以及由于更大的兔免疫库,对不同靶标具有更广泛的免疫反应性。目前已经有针对人Mb的重组兔单克隆抗体成功制备并商业化,用于实验室室研究。不幸的是,迄今为止,尚未报道用于大鼠Mb免疫原的重组兔抗Mb单克隆抗体具有高亲和力、广泛的物种反应性和多方面的应用。

为此,研究人员通过外源性大鼠Mb基因真核表达、动物免疫、杂交瘤筛选、重链和轻链基因测序及瞬时转染质量比优化、重组抗体表达纯化等技术制备的新型重组兔抗大鼠Mb单克隆抗体。具有极高亲和力(KD= 1.21 pM),广泛的物种反应性(小鼠,大鼠,人和马)和良好的组织特异性(骨骼肌和心肌)。应用重组兔抗Mb单克隆抗体通过蛋白质印迹(WB),免疫组织化学和免疫荧光诊断RM-AKI疾病的肾脏,心肌,骨骼肌组织和血液中的Mb沉积。这项研究揭示了新型单克隆抗体在RM相关疾病的潜在应用。

杂交瘤技术是抗体发现主要途径之一,在科研抗体开发和抗体药物发现中都扮演着重要角色。杂交瘤细胞既能无限增殖又能产生特异性抗体,可用来制备高纯度、污染少、可重复的单克隆抗体。

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